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λ核酸外切酶是一种特异性作用于DNA的5'→3'核酸外切酶，能选择性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的双链DNA，对单链DNA和5'端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低，不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。Lambda Exonuclease对5'-0H端的切割速度比5'-P端慢约20倍；对单链DNA的酶切速度比双链DNA慢约100倍。Lambda Exonuclease是表达纯化获得的重组酶。

生成单链PCR产物用于DNA测序；DNA单链构象多态性(SSCP)分析；滚环扩增；从双链DNA片段生成单链DNA；PCR产物的克隆；质粒制备净化。


纯化自携带编码大肠杆菌Lambda核酸外切酶基因的E.coli重组菌株。

组分	1kU	5kU	25kU
λ核酸外切酶(5U/μL)	200μL	1mL	5mL
10×Reaction Buffer	1mL	5mL	25mL

保存：-20℃，有效期2年。


25mM Tris-HCl,50mM NaCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,50% Glycerol,(pH8.0@25℃)。


10×Reaction Buffer：
670mM Glycine-KOH，25mM MgCl₂，500μg/mL BSA，pH9.4@25℃。


不含除Lambda Exonuclease之外的其它种类的外切酶，不含内切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。


加入EDTA至终浓度为至少10mM，75℃孵育10分钟可使Lambda Exonuclease失活。


λ核酸外切酶的最佳反应温度是37℃，在75℃条件下孵育10分钟可使其完全失活。

• 参考下表在冰浴中配制反应体系(以50μL体系为例)。
  

  成分	用量
  10×Reaction Buffer	5μL
  DNA样品	XμL(≤5μg)
  λ核酸外切酶(5U/μL)	1μL(5U)
  超纯水	至50μL

  
  
• 移液器吹打混匀，低速离心使粘附在管壁上的液体沉降至管底。
  
• 反应条件：37℃孵育30分钟。
  
• 终止反应：加入EDTA至终浓度为10mM。
  
• 热失活：75℃孵育10分钟使Lambda Exonuclease失去活性。
  
• 将酶切消化后的产物进行琼脂糖凝胶或聚丙烯凝胶电泳分析，拍照观察并分析酶切效果。
  
• 如果需要进一步纯化处理后的样品，推荐使用以下几种方式之一进行纯化：
  
  • 柱纯化，推荐使用PCR产物DNA纯化试剂盒(货号：YT009)。
    
  • 从琼脂糖凝胶中回收DNA样品，推荐使用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(货号：YT010)。
    
  • 也可酌情进行苯酚/氯仿抽提，然后进行乙醇沉淀。

• λ核酸外切酶对一条链带有5′磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果参考图1。
  
  图1．λ核酸外切酶对仅一条链带有5'磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果图。在20μL反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4,2.5mM MgCl₂,50μg/mL BSA)中，加入5pmol 26bp双链线性DNA片段(其中一条核酸链带有5′磷酸化修饰，另一条链无5′磷酸化修饰)，以及图中指定量的本制品或N公司的Lambda Exonuclease，37℃孵育30分钟进行反应，反应完毕后加入10mM EDTA终止反应，并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μL反应产物，加入2μL 6×DNA Loading Buffer，然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1×TBE作为电泳液，180V电泳40分钟，之后用NadRed红色核酸染料(1:2000稀释)室温染色7分钟，即可拍照观察结果。如图所示，本制品与N公司的竞品相比，具有类似的降解带有5'磷酸化修饰的双链线性DNA的效果。图中效果仅供参考。
  
• λ核酸外切酶对5'磷酸化修饰的单链线性DNA消化的效果参考图2。
  
  图2．λ核酸外切酶对5′磷酸化修饰的单链线性DNA消化的效果图。在20μL反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4,2.5mM MgCl₂,50μg/mL BSA)中，加入10pmol 26nt单链线性DNA片段(5′磷酸化修饰)，以及图中指定量的本制品或N公司的Lambda Exonuclease，37℃孵育30分钟进行反应，反应完毕后加入10mM EDTA终止反应，并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μL反应产物，加入2μL 6×DNA Loading Buffer，然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1×TBE作为电泳液，180V电泳40分钟；之后用NadRed红色核酸染料(1:2000稀释)室温染色7分钟，即可拍照观察结果。如图所示，本制品与N公司的竞品相比，具有类似的降解带有5'磷酸化修饰的单链线性DNA的效果。图中效果仅供参考。
  
• λ核酸外切酶对无5'磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果参考图3。
  
  图3．λ核酸外切酶对无5'磷酸化修饰的双链线性DNA消化的效果图。在20μL反应体系(67mM Glycine-KOH pH9.4,2.5mM MgCl₂,50μg/mL BSA)中，加入5pmol 26bp双链线性DNA片段(无5'磷酸化修饰)，以及图中指定量的本制品或N公司的Lambda Exonuclease，37℃孵育30分钟进行反应，反应完毕后加入10mM EDTA终止反应，并在75℃条件下孵育10分钟进行灭活处理。取出10μL反应产物，加入2μL 6×DNA Loading Buffer，然后进行10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。用1×TBE作为电泳液，180V电泳40分钟；之后用NadRed红色核酸染料(1:2000稀释)室温染色7分钟，即可拍照观察结果。如图所示，本制品与N公司的竞品相比，均不能有效的消化无5'磷酸化修饰的双链线性DNA。图中效果仅供参考。

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